? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

是酶免疫測定技術(shù)中應用最廣泛的技術(shù)

ELISA Kit的誕生

幫助科研工作者省掉了繁瑣的實驗過程

提高了科研效率！

選對試劑盒

配合好的實驗技巧

會讓實驗效率事半功倍~

那么如何挑選合適的ELISA試劑盒？

↓↓↓今天小鹿就來告訴你?

1 查找待測樣本的蛋白濃度范圍

參考數(shù)據(jù)庫：通過NCBI、UniProt、Pax-Db等數(shù)據(jù)庫查找目標蛋白的表達量參考值，確保試劑盒的檢測范圍與參考值一致。

2 試劑盒的應用種屬和檢測樣本種類

種屬特異性：不同種屬的樣本通常不能通用，除非試劑盒特別說明。

樣本類型：常見的樣本類型包括血清、血漿（不同抗凝劑）、細胞上清和細胞裂解液，不同樣本可能需要不同的試劑盒，要先確保試劑盒適用于您的樣本類型。

3 試劑盒的檢測范圍

標曲范圍：確保待測樣本的濃度落在試劑盒的標準曲線范圍內(nèi)。對于高濃度樣本，建議先進行預實驗以確定合適的稀釋倍數(shù)。由于樣本之間存在個體差異，一般建議選擇4個以上的樣本進行預實驗，以確定最佳稀釋倍數(shù)。

4?試劑盒的靈敏度

選擇適合待檢指標含量的靈敏度，低含量指標需選擇高靈敏度試劑盒。

1 樣本的準備

新鮮樣本：盡量使用新鮮樣本，避免使用溶血、溶脂、保存時間過長或凝固不全的樣本。

保存條件：如果不能立即測定，5天內(nèi)應4℃保存，1周后檢測的樣本應低溫凍存，避免反復凍融。

2 仔細閱讀說明書

熟悉流程：推薦畫出簡要步驟圖，提前準備試劑，濃縮試劑提前配制工作液。

批次一致性：不同批次的試劑不要混用，檢查各組分的有效期。

3 預包被酶標板和試劑組份的平衡

室溫平衡：預包被的酶標板條和各試劑組份需室溫平衡30分鐘以上，以確保反應微孔內(nèi)的溫度達到所需溫度，避免弱陽性樣本漏檢。

4 待測樣本加樣

分批操作：樣本過多時建議分批操作，提前做好稀釋。

加樣技巧：控制加樣時間，避免誤差；垂直加入孔底，避免接觸孔壁；使用一次性移液頭，防止交叉污染。

5 孵育和洗板

孵育條件：根據(jù)說明書選擇孵育時間和溫度，為了避免溫度不均，盡量采用恒溫孵育箱進行孵育。

洗板技巧：手工洗板時垂直拍板，避免交叉污染；洗板機洗板時檢查沖洗頭是否通暢。

6 顯色

顯色條件：TMB作為底物反應溶液，需要量取所需的量進行添加，禁止全部倒出后再將余量倒回，37℃反應20分鐘（可酌情縮短或延長孵育時間，時間不超過30分鐘），顯色反應需避光。

7 讀數(shù)和數(shù)據(jù)分析

及時讀數(shù)：終止反應后15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果，酶標儀需預熱15-30分鐘，注意選擇合適的波長進行讀數(shù)。