技術(shù)專欄

            實(shí)驗(yàn)動物如何采血及采血管的選擇
            供稿:市場部發(fā)布時間:2023-07-27瀏覽量:1432次

            實(shí)驗(yàn)動物采血

            在實(shí)驗(yàn)研究中,經(jīng)常會采集實(shí)驗(yàn)動物血液用于分析和評估動物體內(nèi)的生理和病理情況。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和要求及動物的特性和生理差異,選擇合適的采血方法,可以減少動物傷害,提高實(shí)驗(yàn)的成功率和結(jié)果的可靠性。今天小編給大家普及下實(shí)驗(yàn)動物采血方法及采血管的選擇。

             

            01 大鼠、小鼠采血方法

            尾尖采血(剪尾采血)

            采血方法:動物麻醉后并固定,將鼠尾在45-50℃溫水中浸泡數(shù)分鐘,也可用二甲苯等化學(xué)藥物涂擦,使局新血管擴(kuò)張。擦干尾部,用酒精棉球消毒鼠尾,用無菌手術(shù)刀,快速截?cái)嘈∈笪布饧s1-2mm,可以從尾部向尾尖方向按摩,以增加血流。用毛細(xì)采血管收集血液,或直接滴入收集管中。采血結(jié)束后,用干棉球按壓傷口或使用止血劑來止血。

            應(yīng)用:所需血量少的連續(xù)多次采次,此法每只鼠可采血10余次。常用于紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測定、制作血涂片等。

            采血量:小鼠可每次采血約0.1ml,大鼠約0.4ml。

            優(yōu)點(diǎn):操作較簡單,動物不致死,可多次重復(fù)采血。

            缺點(diǎn):取血量少,約0.1ml,采血速度慢,不適于樣本量大和需要較多血量的實(shí)驗(yàn);不適用于老齡鼠;按摩鼠尾時可能會增加溶血風(fēng)險(xiǎn),易污染。

            頸靜脈采血

            采血方法:左手固定大鼠,使大鼠呈現(xiàn)腹部朝上的一個“十”字形,讓大鼠頸部依靠在保定器上,頸部與前肢呈大于90°角,用頭部固定器扭動頸部,使鎖骨出現(xiàn)一個三角窩,去除鎖骨附近被毛,酒精棉球擦拭消毒。右手持注射器,沿鎖骨處進(jìn)針(去除毛發(fā)后可清晰可見靜脈處),刺穿皮膚后輕回拉注射器,使注射器產(chǎn)生負(fù)壓。大約30度向上進(jìn)針,當(dāng)注射器內(nèi)有血液出現(xiàn)時說明已經(jīng)刺入采血位置,保持注射器,回拉注射器完成采血。采血完成后用干棉球稍按壓止血即可。

            應(yīng)用:適用于人手少、動物數(shù)量多、實(shí)驗(yàn)時間緊以及藥代動力學(xué)等需連續(xù)少量取血的研究中。

            優(yōu)點(diǎn):相對于眼眶后靜脈叢采血法對動物造成的疼痛感更小,更加符合動物福利,所以現(xiàn)在大有取代眼眶后靜脈叢采血的趨勢。本法適用于大鼠。

            缺點(diǎn):要求技術(shù)熟練,在一定時間內(nèi),如果采血量和采血次數(shù)增加,會使動物引起一定的應(yīng)激性反應(yīng)或采血部位的傷害。

            眼眶靜脈叢采血

            采血方法:動物麻醉后并放置動物臺上,用左手拇指和食指壓迫小鼠頸部兩側(cè)同時將皮膚向后拉(注意避免用力過度壓迫氣管),使眼球外突,提示眼眶后靜脈叢充血。右手拿一毛細(xì)管(建議采用0.5*100mm規(guī)格的毛細(xì)管,在使用前折成小段,每段大約3-4cm),置于內(nèi)側(cè)眼角處,并且以與鼻翼平面成30-45度沿內(nèi)眥插入內(nèi)眼角,滑入眼球后方,輕輕向眼底方向刺入。不能刺地過深,一般小鼠2-3mm,大鼠4-5mm即可。當(dāng)感到阻力時即停止推進(jìn),轉(zhuǎn)180°使斜面對著眼眶后界,即有血液流出。采血結(jié)束后,立即松開手指對小鼠的壓迫,使眼球復(fù)位,同時拔出毛細(xì)管??捎酶擅耷驂鹤⊙劭簦_保止血。

            應(yīng)用:適用于需中等量血液、避免小鼠死亡的血液指標(biāo)連續(xù)監(jiān)測。

            優(yōu)點(diǎn):眼眶后靜脈叢采血法簡單,便于掌握,采血成功率高,小鼠死亡率低,血流較快。

            采血量:小鼠可采血約0.2-0.3ml,大鼠約0.4-0.6ml。

            缺點(diǎn):采血后需要至少10天的組織修復(fù)過程,否則采血量產(chǎn)生一定影響;不能采集到無菌的血樣,血液中可能混有眼窩內(nèi)的組織液和腺體分泌物,對于血樣要求較高的研究,應(yīng)謹(jǐn)慎使用;易損傷眼球,易感染,造成失明。

            腹主動脈采血法

            采血方法:大鼠麻醉后仰臥固定在實(shí)驗(yàn)臺上,將大鼠腹腔注射10%水合氯醛以0.03ml/kg麻醉5min即可。大鼠背部放置一粗試管以充分暴露腹主動脈,常規(guī)消毒后用手術(shù)剪刀沿腹正中線剪開腹腔。術(shù)后右手持穿刺針針尖斜面朝下入針角度約25°~30°朝向心端放向刺入,深度以5mm左右為宜,抽吸血液即可。

            采血量:大鼠可采血約8~10ml,一般采3種血樣全過程只需2min。

            優(yōu)點(diǎn):該采血法取血量大、不易溶血,血液質(zhì)量較好,適用于多項(xiàng)目檢測,且不損傷器官,有利于病理組織學(xué)檢查。

            缺點(diǎn):操作比較復(fù)雜,應(yīng)注意掌握適宜的麻醉深度,防止心跳驟停,同時防止大鼠躁動。本方法造成的出血速度快,易造成出血性的心臟停跳,故要防止采血過程中出血。

             

            02 豚鼠采血方法

            耳緣切口采血:

            先將豚鼠耳消毒,用刀片沿血管方向割破耳緣,切口約長0.5cm,在切口邊緣涂上20%的檸檬酸鈉溶液,防治血凝,則血可自切口處流出。此法采血每次可采0.5ml。

            背中足靜脈采血:

            固定豚鼠,將其右或左后肢膝關(guān)節(jié)伸直,腳背消毒,找出足靜脈,左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端,右手將注射針刺入靜脈,拔針后立即出血。

            心臟采血:

            用手指觸摸,選擇心跳最明顯的部位,把注射針刺入心臟,血液即流入針管。心臟采血時所用的針頭應(yīng)細(xì)長些,以免發(fā)生采血后穿刺孔出血。

             

            03 兔的采血方法

            耳緣靜脈采血:

            將兔固定,拔去耳緣靜脈局部的被毛、消毒,用手指輕彈兔耳,使靜脈擴(kuò)張,用針頭刺耳緣靜脈末端,或用刀片沿血管方向割破一小切口,血液即流出。本法為兔最常用的采血方法,可多次重復(fù)使用。

            耳中央動脈采血:

            在兔耳中央有一條較粗的、顏色較鮮紅的中央動脈。用左手固定兔耳,右手持注射器,在中央動脈的末端,沿著與動脈平行的向心方向刺入動脈,即可見血液進(jìn)入針管。由于兔耳中央動脈容易痙攣,故抽血前必須讓兔耳充分充血,采血時動作要迅速。采血所用針頭不要太細(xì),一般用6號針頭,針刺部位從中央動脈末端開始,不要在近耳根部采血。

            頸靜脈采血:

            采血量超過1ml時,頸靜脈是常用的采集部位。方法同大鼠頸靜脈采血。

            心臟采血:

            使家兔仰臥,穿刺部位在第三肋間胸骨左緣3mm處, 針頭刺入心臟后,持針手可感覺到兔心臟有節(jié)律的跳動。此時如還抽不到血,可以前后進(jìn)退調(diào)節(jié)針頭的位置,注意切不可使針頭在胸腔內(nèi)左右擺動,以防弄傷兔的心、肺。

             

            04 狗的采血方法

            后肢外側(cè)小隱靜脈采血:

            后肢外側(cè)小隱靜脈位于后肢脛部下三分之一的外側(cè)淺表皮下,由前側(cè)方向后行走。采血時,將動物固定,局部剪毛、消毒,采血者左手緊握剪毛區(qū)上部或扎緊止血帶,使下部靜脈充血,右手用連有6號或7號針頭的注射器刺入靜脈,左手放松,已適當(dāng)速度抽血即可。

            前肢背側(cè)皮下頭靜脈采血:

            前肢背側(cè)皮下頭靜脈位于前腳爪的上方背側(cè)的正前位。采血方法同上。

            頸靜脈采血:

            前兩種方法需技術(shù)熟練,且不適于連續(xù)采血。大量或連續(xù)采血時,可采用頸靜脈采血,方法同小鼠、大鼠的頸靜脈采血方法。

            股動脈采血:

            本法為采取動脈血最常用的方法。操作簡便,稍加訓(xùn)練的狗,在清醒狀態(tài)下將狗臥位固定于狗解剖臺上。伸展后肢向外伸直,暴露腹股溝三角動脈搏動的部位,剪毛、消毒,左手中指、食指探模股動脈跳動部位,并固定好血管,右手取連有5號半針頭的注射器,針頭由動脈跳動處直接刺入血管,若刺入動脈一般可見鮮紅血液流入注射器,有時還需微微轉(zhuǎn)動一下針頭或上下移動一下針頭,方見鮮紅血液流入。有時可能刺入靜脈,必須重抽。抽血畢,迅速拔出針頭,用干藥棉壓迫止血2-3分鐘。

            紅色頭蓋:普通血清管,采血管不含有任何添加劑,用于常規(guī)血清生化,血庫和血清學(xué)相關(guān)檢驗(yàn);

            桔紅色頭蓋:快速血清管,采血管內(nèi)有促凝劑,加速凝血過程。適用于急診血清的化驗(yàn)系列;

            金黃頭蓋:惰性分離膠促凝管,一般用于急診血清生化試驗(yàn);

            綠色頭蓋:肝素抗凝管,一般用于紅細(xì)胞壓積實(shí)驗(yàn),紅細(xì)胞脆性試驗(yàn),血?dú)夥治觯良捌胀ǖ纳瘻y定;

            紫色頭蓋:又叫EDTA抗凝管,一般是用于普通的血液學(xué)檢測,但是不適用于凝血實(shí)驗(yàn)及血小板功能的檢測,也不能用于鈉、鉀、鈣、鐵、堿性磷酸等的測定;

            淺藍(lán)色的頭蓋:枸櫞酸鈉,凝血實(shí)驗(yàn)管;

            黑色頭蓋:枸櫞酸鈉血沉實(shí)驗(yàn)管;

            灰色頭蓋:草酸鉀、氟化鈉,氟化鈉管,適用于血糖測定,一般不用于尿素酶法測定尿素,常用于血糖檢測。

             

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